产品货号：
BTN101109
中文名称：
粪便RNA柱式提取试剂盒
英文名称：
Fecal RNA column Extraction Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
由于粪便中有机质含量丰富，对RT-PCR等后续反应有极大的抑制作用，所以从粪便中提取高纯度的RNA一直是十分棘手的问题。本制品是在粪便RNA提取试剂盒基础上开发的柱式粪便RNA提取产品。
试剂盒特点：
试剂盒组成：
储存条件：常温运输和保存，有效期两年。
使用方法：
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试剂盒特点：
- 操作比非柱式法更加简单快速，处理一个样品只需要约十几分钟。
- 去污染效果好，RNA纯度更高，平均OD260/280一般都在2.0左右。
- 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
- 性价比高于进口的柱式粪便RNA提取产品。
- 试剂无毒无害，环保。
试剂盒组成：
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 50mL |
| 酸洗玻璃珠，400μm | 25g |
| 溶液B | 15mL |
| 溶液C | 50mL |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50mL |
| RNA洗脱液 | 10mL |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：常温运输和保存，有效期两年。
使用方法：
- 在自备的3～5mL离心管中称取0.5～1g粪便，加入0.5g玻璃珠和1mL溶液A，盖紧离心盖后震荡器上剧烈震荡5～10分钟。
注意：如果放置在低温，溶液A可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。 - 稍微静置后将上清液(一般呈棕色)转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中。所取上清液不要超过1mL，否则后续操作没有足够空间。
- 在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备氯仿，在振荡器上振荡30秒混匀。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
- 室温12000rpm离心3～5分钟。
- 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μL上清液不取。
- 在上清液中加入等体积的溶液C，用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。
- 室温12000rpm离心3分钟，两相间将有白色膜状物(蛋白质)形成。
- 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，套入收集管中厚12000rpm室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
- 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，套入收集管中后12000rpm室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
- 加0.7mL通用洗柱液，套入收集管中后室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
- 加0.3mL通用洗柱液，套入收集管中后室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。此步可以省略。
- 将离心吸附柱套入收集管中后室温离心半分钟，弃含穿透液的收集管。此步干甩十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
- 将离心吸附柱套入到一个自备的RNase-free收集管中，加入30～100μL RNA洗脱液，室温放置1～2分钟。
- 12000rpm室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
- RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子。
- RNA产量产率测定：将5～10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5～8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
- RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8～2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。
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